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2022-12-03 16:14
原理
膜脂主要包括磷脂和糖脂。样品经高温处理以除去水分并使脂酶钝化,用氯仿-甲醇溶液研磨抽提总脂,再用石油醚反复冲洗去除中性脂,得到膜的极性脂,碱性条件下膜脂与甲醇反应产生高级脂肪酸甲酯。
获得的高级脂肪酸甲酯注入气相色谱柱,通过汽化室汽化后被载气带入分离柱,根据各组分在分离柱中保留时间不同而被分离。用标准脂肪酸的保留时间(所谓的保留时间Rt:理论上是指样品在分离柱中运行所用的时间,实际中是以加样为起始零时间,物质到达检测器达到浓度最大时为终止时间,从起始零时间到终止时间为保留时间)定性各组分。用面积归一法(所谓面积归一法是将各组分色谱峰的总面积之和视100,各组分的峰面积在其中所占的百分比为各组分的相对值的定量方法)定量计算各种
脂肪酸
含量。仪器设备
(
1)气相色谱仪 (2) 色谱工作站或积分仪
(
3)LKB油脂快速提取仪 (4) 烘箱
(
5)分液漏斗 (6)1mL移液管
(
7)10mL带塞刻度试管 (8)60目的筛
(
9)100 mL量筒
试剂
(1).氯仿-甲醇溶液1:2(体积比) (2).氯仿
(3).0.76%NaCl溶液 (4)甲醇饱和的石油醚溶液
(5).石油醚-苯溶液:将一份石油醚(30-60℃沸程)与等体积的苯混合(体积比)即可。
(6).0.4 mol·L-1 KOH-甲醇溶液:称取22.4g KOH溶于甲醇中,并定容至1000mL。
(7).无水乙醇。
(8).脂肪酸标样:棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸和花生酸等。
方法步骤
1.总脂的抽提
(1).取适量植物样品,100℃烘3060 min,以便除去水分和钝化脂酶。取出样品冷却至室温,粉碎后过60目的筛,称过筛后的样品5g放入滤纸筒.在上面覆盖一层脱脂棉,装入LKB油脂快速提取仪的样品室,浸泡于约60 mL氯仿-甲醇提取液中,开循环冷却水室温过夜或 10h。
(2).打开加热开关并调节温度旋钮,使提取液处于微沸状态,维持1 h后关闭加热开关。
(3).打开提取仪样品室的旋钮,使提取液流入蒸馏瓶(预先加几粒玻璃珠),打开回流加热开关.调节温度调节旋钮,蒸馏蒸馏瓶中的提取液,并使冷却后的液体流过样品室再回到蒸馏瓶中,如此回流提取1 h,关闭加热开关。目的是淸洗样品室壁和滤纸筒中黏附的残留脂。
(4).关闭提取仪旋钮,取出滤纸筒。
(5).打开回流加热开关,再将蒸馏瓶中的样品蒸发至只含少量提取液,关闭加热开关。
(6).再将蒸馏瓶取下于100℃烘烤1 h,烘干提取液获得总脂。
2.膜脂的抽提
将获得的总脂溶于甲醇饱和的石油醚溶液中,充分振荡,静置分层后,回收下层甲醇溶液。如此重复
23次,最后浓缩甲醇溶液获得膜脂。
3.膜脂脂肪酸的甲酯化
(1).取膜脂0.1 mg于10 mL 具塞试管中,加1mL石油醚-苯混合液使之溶解,再加 0.4 molL-1 KOH-甲醇溶液1mL, 充分振荡后室溫反应2060 min(夏季20 min,冬季 60 min) 。
(2).加入蒸馏水使上层有机相至约10 mL刻度处,再充分混匀后静置,直至溶液分为清晰可辨的上下两层。
(3).如果有机相混浊,加入23滴无水乙醇,静置片刻,待用。
4. 称取标样 各 0. 1 mg,分别溶于1mL 的苯:石油醚=1 : 1(体积比)中,0.4molL -1 KOH-甲醇溶液甲基化30 min.重复3(2)3(3)步骤
5.仪器条件
(1).柱型:6%10%DEGS(聚二乙二醇丁二酸酯),101白色硅烷化担体(酸洗)。
(2).温度:液化室250 ℃,柱温195℃,检测器250℃。
(3).气体流速:载气(N2
)流速,
30 mLmin-1
;
H2 流速,40 mLmin-1;
空气流速,
30 mLmin-1.
(4).信号调节:1×102
或
1×10.。
6.进样
(1).用微量进样器吸取标样上层有机相各1μL进样,同时启动色谱工作站记录色谱峰和相关数据(主要为Rt和峰面积),记为Rt0.
(2).用微量进样器吸取样品1μL进样,同时启动色谱工作站记录色谱峰和相关数据,记为Rtx
。
7.结果计算
(1).定性(标准物质定性法):通过样品与标准的保留时间和峰面积进行比较,确定样品中HFA(高级脂肪酸)的类型。当样品中某峰的Rtx
与
Rt0
相同,则样品中此峰便与
Rt0
所对应的
HFA为同一HFA。
(2).定量(面积归一法)。
式中,
Pi
:某脂肪酸的百分含量;
A1
、
A2
、
A3···An
:各脂肪酸的峰面积;
Ai
:被测脂肪酸的峰面积。可以由色谱工作站或积分仪自动给出。
注意事项
(1).步骤1(1)将过筛后的样品放入滤纸筒后,在上面一定要覆盖一层脱脂棉,但不能太厚。。
(2).步骤1(2)打开加热开关注意调节温度旋钮,一定要使提取液保持微沸状态,切忌温度不能太高。
(3).保证被分析的样品清亮。
#上海液质检测#
现如今试管婴儿已经成为了一种使用率比较高的助孕方式了,但是有一部分人依然不能够正确的理解试管婴儿,甚至认为只要移植成功了就万事大吉了,其实试管婴儿也像自然受孕一样可能会出现
流产
的情况,因此移植成功之后各方面也要特别注意,尤其是饮食方面,避免因饮食不当而导致流产的发生。
试管婴儿移植后的饮食原则有哪些呢?>
1、 安全健康饮食>
试管婴儿移植之后尽量在家里吃饭,这样可以确保饮食的干净和卫生,尽量避免到外面用餐。因为食物当中的病菌和细菌进入人体之后,可能会导致身体不适,从而导致移植结果受到不良的影响。
2、 吃容易消化,而且营养丰富的食物>
女性怀孕之后消化功能会有所下降,而且也需要更多的营养做支撑,因此移植成功之后要多吃一些容易消化而且营养丰富的食物,比如稀饭、蔬菜和水果等等,粗糙或者难以消化的食物尽量不要吃,比如油炸类食物。
3、 保持营养均衡>
刚刚移植成功之后,会因为取卵而出现稍微的不适感,比如
腹胀
等等,在这种情况下要多补充高蛋白的食物,比如鸡蛋或者牛奶,减少盐的摄入量,同时要多吃容易消化的食物,并且采取少量多餐的习惯,如果出现了
腹水
或者
胸腔积液
的情况,则要多喝鱼汤或者冬瓜汤,这些食物有助于利尿
,那不可以过
多食
用。
4、 远离容易导致 过敏 的食物
移植成功之后女性是不可以随便用药的,因此女性在饮食方面要尽量避免吃容易导致过敏的食物,尤其不要尝试新的食物,一旦出现过敏的现象,则会使女性
瘙痒
难忍,但是却
无
法吃药,促使女性处于
疲劳
的状态,增加流产的几率。
5、 避免冷饮或者容易产生胀气的食物>
移植成功之后尽量不要喝冷饮,比如冰镇的饮料或者雪糕,这类食物会对肠道造成刺激,从而导致拉肚子的发生,而拉肚子则会引起宫缩,从而影响胚胎的着床。另外移植成功之后也不能够吃容易产生胀气的食物,比如土豆或者红薯,以免导致肠胃不适。
温馨提示
移植成功的女性还要避免
便秘
的发生,因为用力排便也会影响胚胎的着床,因此试管婴儿移植之后要多吃一些富含膳食纤维的食物,比如蔬菜、燕麦、新鲜的玉米、苹果等等。
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